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詳細(xì)分析組織細(xì)胞固定液的使用方法及注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù)：14308 更新時(shí)間：2019-05-17
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　　組織細(xì)胞固定液的作用：
　　組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進(jìn)行固定，當(dāng)然有的組織是先固定，再進(jìn)行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學(xué)的角度其簡(jiǎn)單的定義是，保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使之盡量保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，而從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng)；防止細(xì)胞的自溶，以免使抗原擴(kuò)散至組織間質(zhì)；以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)；更重要的是保持組織或細(xì)胞的抗原性，不但要使抗原不導(dǎo)致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時(shí)，不產(chǎn)生過深的背景，影響對(duì)陽性物的判斷。

　　組織細(xì)胞固定液的使用說明：
　　1、對(duì)于細(xì)胞樣品，去除培養(yǎng)液后，按照每六孔板一個(gè)孔加入 1 毫升固定液的比例，加入 4%多聚甲醛固定液。對(duì)于細(xì)胞涂片等其它細(xì)胞樣品，加入固定液的量以充分蓋住樣品為準(zhǔn)。通常室溫固定 10-20 分鐘即可，但固定較長(zhǎng)時(shí)間，例如 1-2 小時(shí)也是可以的。后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?/div>
　　2、對(duì)組織切片，加入 4%多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準(zhǔn)，或使用染色架進(jìn)行固定。通常室溫固定 10-20 分鐘即可完成固定，但切片較厚時(shí)可以固定較長(zhǎng)時(shí)間，例如 1-2 小時(shí)。后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?/div>
　　3、對(duì)于組織塊樣品，浸泡入 4%多聚甲醛固定液中，室溫或 4℃浸泡固定 2-24 小時(shí)。建議不超過 8 小時(shí)，除非組織塊特別大，難以滲透。固定完成后，放入裝有蒸餾水的離心管中清洗，每 15-30 分鐘換一次，共 6-8 次，建議在搖床進(jìn)行，或用流水沖洗 1-2 小時(shí)。隨后梯度脫水，進(jìn)行包埋。如果暫時(shí)不包埋可放入 70-75%的酒精中保存。

　　組織細(xì)胞固定液的注意事項(xiàng)：
　　1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。
　　2、多聚甲醛雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆，切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過 24 小時(shí)。
　　3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 *掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí)，有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
　　4、本產(chǎn)品對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
　　5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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